Využití magnetických částic při izolaci DNA z rybízových džemů

Application of magnetic particles for DNA isolation from currant jams

abstract

Czech

Práce byla zaměřena na testování mikroizolace DNA za pomocí magnetických částic z tepelně zpracovaných potravinových výrobků v kvalitě vhodné pro PCR. Pro analýzu byly použity rybízové džemy. Ty byly homogenizovány s použitím plastového kopistu a stomacheru v lyzačním roztoku s CTAB. Při přípravě homogenátů byl testován vliv chloroform-oktanolu a isopropanolu. Homogenáty byly použity pro izolaci DNA magnetickými částicemi. Byly testovány dva druhy magnetických částic: mikročástice P(HEMA-co-GMA) a nanočástice oxidů železa pokryté poly(L-lysinem) – PLL. Kvantita a kvalita izolované DNA byla stanovena spektrofotometricky. Poté byla testována amplifikovatelnost DNA v PCR. Pro amplifikaci byly použity primery specifické pro rostlinnou ribosomální DNA. Produkty PCR s očekávanou délkou 700 bp byly detegovány agarózovou gelovou elektroforézou. Bylo zjištěno, že z džemů lze pomocí testovaných magnetických nosičů izolovat DNA v kvalitě vhodné pro PCR.

The work has been focused on testing of micromethod of DNA isolation using magnetic particles from thermic-managed food products in a quality suitable for PCR. Currant jams were selected for the analysis. These were homogenized using plastic copist and stomacher in lysis buffer with cetyltrimethylammonium bromide (CTAB). The effect of chloroform-octanol and isopropanol in the preparation of homogenates was tested. Homogenates were used for DNA isolation by magnetic particles. Two types of magnetic particles were tested: microparticles of P(HEMA-co-GMA) and nanoparticles of iron oxides covered by poly(L-lysine) – PLL. The concentration and quality of isolated DNA was verified by UV spectrophotometry. Amplification of the DNA was tested in PCR. Primers specific for plant ribosomal DNA were used. PCR products of expected length 700 bp were detected by agarose gel electrophoresis. It was shown that DNA isolated from currant jams using magnetic particles was in PCR-ready quality.

izolace DNA, magnetické mikročástice, magnetické nanočástice, PCR

isolation of DNA, magnetic microparticles, magnetic nanoparticles, PCR

Hronová Aneta, Kovařík Aleš, Španová Alena, Rittich Bohuslav

23. 3. 2017

VUT v Brně, Fakulta chemická, Purkyňova 464/118 612 00 Brno

Brno

FCH-S-17-4695

Chemie je život 2017

1

31

31

1