Detail předmětu
Laboratory Classes in Biochemistry
FCH-BAO_BCH_PAk. rok: 2025/2026
Základy biochemické analytiky a separačních metod: sacharidy, lipidy, lipofilní barviva, aminokyseliny. Metody stanovení bílkovin. Enzymy – stanovení aktivity a rychlosti enzymové rekce. Enzymová kinetika. Izolace apurifikace nukleových kyselin. Speciální metody: izolace a charakterozyce enzymů z různých typů biologického materiálu, chromatografie bílkovin, elektromigrační metody (dělění bílkovin metodou PAGE-SDS, dělení nukleovýchkyselin v agarózovém gelu).
Jazyk výuky
angličtina
Počet kreditů
2
Garant předmětu
Zajišťuje ústav
Nabízen zahraničním studentům
Pouze domovské fakulty
Vstupní znalosti
Zkouška Biochemie 1.
Pravidla hodnocení a ukončení předmětu
Podmínky udělení zápočtu: absolvování všech 12 úloh praktika, vypracování všech protokolů; absolvování zápočtového testu na minimálně 70 %.
Podmínkou pro udělení zápočtu je absolvování všech 12 praktických úloh a splnění závěrečného testu na 70%.
Podmínkou pro udělení zápočtu je absolvování všech 12 praktických úloh a splnění závěrečného testu na 70%.
Učební cíle
Cilem kursu je prakticky obeznamit posluchace se zakladnimi pristupy manipulace s biologickym materialem, s dostupnymi biochemickymi separacnimi i analytickymi metodami a zaklady prace s enzymy. Ziskane znalosti jsou zakladem pro dalsi vyuku praktickych disciplin specializace PCHBT, zejmena praktika z biotechnologie.
Studenti ziskaji zakladni dovednosti tykajici se izolace a purifikace bio-
polymeru a dalsich slozek z biologickeho materialu, stability biologickych
makromolekul,moznosti jejich stanoveni a analytickeho vyuziti.
Studenti ziskaji zakladni dovednosti tykajici se izolace a purifikace bio-
polymeru a dalsich slozek z biologickeho materialu, stability biologickych
makromolekul,moznosti jejich stanoveni a analytickeho vyuziti.
Základní literatura
Márová I., Vránová D./Pracovní sešit - praktikum z biochemie (EN)
Zařazení předmětu ve studijních plánech
- Program NPAP_ENVI magisterský navazující 1 ročník, zimní semestr, volitelný
Typ (způsob) výuky
Laboratorní cvičení
52 hod., povinná
Vyučující / Lektor
Osnova
1.blok
1. Sacharidy
a) kvalitativní reakce sacharidů
b) chromatografie sacharidů na tenké vrstvě
2. Lipidy
a) preparace lipidických frakcí z vaječného žloutku
b) enzymová hydrolýza lecitinu fosfolipázou D
c) identifikace lipidů z vaječného žloutku
3. Lipofilní barviva
a) adsorpční chromatografie listových barviv (špenát) a karotenoidů (paprika) na tenké vrstvě, izolace frakce -karotenu
b) izolace -karotenu z papriky sloupcovou adsorpční chromatografií
c) RP-HPLC izolované frakce karotenu z tenké vrstvy silikagelu a ze sloupcové chromatografie - srovnání čistoty preparátů
d) fotometrické stanovení izolovaných barviv
4. Aminokyseliny
a) chemické reakce aminokyselin a peptidů
b) chromatografické dělení směsi aminokyselin papírovou chromatografií
5. Bílkoviny
a) stanovení celkových proteinů biuretovou metodou
b) stanovení celkových proteinů Hartree-Lowryho metodou
c) stanovení proteinů metodou Bradfordové (vazba Coomassie modři)
d) srovnání citlivosti použitých metod kvantitativního stanovení bílkovin
6. Enzymy I
a) fotometrické stanovení enzymové aktivity transaminas z vepřového srdce
b) určení počáteční rychlosti enzymové reakce (hydrolýza želatiny trypsinem)
7. Enzymy II - kinetika
a) substrátová specifita sacharasy
b) pH optimum enzymové reakce alfa-amylasy
8. Izolace a purifikace nukleových kyselin z různých zdrojů
a) izolace DNA z telecího brzlíku
b) izolace RNA z kvasnic
c) důkaz DNA a RNA reakcí s difenylaminem
2.blok
9. Izolace a částečná charakterizace enzymů z různých typů biologického materiálu
a) izolace aminoxidázy z klíčků hrachu frakcionovaným srážením; dialýza
b) stanovení čistoty získaných preparátů, vypracování izolačního schématu
c) izolace ureasy a její aplikace ke stanovení močoviny
10. Gelová permeační chromatografie
a) příprava azoderivátu bílkoviny
b) příprava kolony a stabilizace sloupce, stanovení mrtvého objemu
c) izolace barevného derivátu bílkoviny gelovou filtrací na Sephadexu G-25
11. Dělení bílkovin horizontální elektroforézou
a) elektroforetické dělení směsi bílkovin na acetátcelulózovém nosiči
b) elektroforetické dělení bílkovin v agarózovém gelu
12. Stanovení relativní molekulové hmotnosti bílkovin elektroforézou PAGE-SDS
a) příprava polyakrylamidového gelu pro vertikální elektroforézu
b) stanovení Mr vybraných proteinů elektroforézou v polyakrylamidovém gelu v přítomnosti SDS
1. Sacharidy
a) kvalitativní reakce sacharidů
b) chromatografie sacharidů na tenké vrstvě
2. Lipidy
a) preparace lipidických frakcí z vaječného žloutku
b) enzymová hydrolýza lecitinu fosfolipázou D
c) identifikace lipidů z vaječného žloutku
3. Lipofilní barviva
a) adsorpční chromatografie listových barviv (špenát) a karotenoidů (paprika) na tenké vrstvě, izolace frakce -karotenu
b) izolace -karotenu z papriky sloupcovou adsorpční chromatografií
c) RP-HPLC izolované frakce karotenu z tenké vrstvy silikagelu a ze sloupcové chromatografie - srovnání čistoty preparátů
d) fotometrické stanovení izolovaných barviv
4. Aminokyseliny
a) chemické reakce aminokyselin a peptidů
b) chromatografické dělení směsi aminokyselin papírovou chromatografií
5. Bílkoviny
a) stanovení celkových proteinů biuretovou metodou
b) stanovení celkových proteinů Hartree-Lowryho metodou
c) stanovení proteinů metodou Bradfordové (vazba Coomassie modři)
d) srovnání citlivosti použitých metod kvantitativního stanovení bílkovin
6. Enzymy I
a) fotometrické stanovení enzymové aktivity transaminas z vepřového srdce
b) určení počáteční rychlosti enzymové reakce (hydrolýza želatiny trypsinem)
7. Enzymy II - kinetika
a) substrátová specifita sacharasy
b) pH optimum enzymové reakce alfa-amylasy
8. Izolace a purifikace nukleových kyselin z různých zdrojů
a) izolace DNA z telecího brzlíku
b) izolace RNA z kvasnic
c) důkaz DNA a RNA reakcí s difenylaminem
2.blok
9. Izolace a částečná charakterizace enzymů z různých typů biologického materiálu
a) izolace aminoxidázy z klíčků hrachu frakcionovaným srážením; dialýza
b) stanovení čistoty získaných preparátů, vypracování izolačního schématu
c) izolace ureasy a její aplikace ke stanovení močoviny
10. Gelová permeační chromatografie
a) příprava azoderivátu bílkoviny
b) příprava kolony a stabilizace sloupce, stanovení mrtvého objemu
c) izolace barevného derivátu bílkoviny gelovou filtrací na Sephadexu G-25
11. Dělení bílkovin horizontální elektroforézou
a) elektroforetické dělení směsi bílkovin na acetátcelulózovém nosiči
b) elektroforetické dělení bílkovin v agarózovém gelu
12. Stanovení relativní molekulové hmotnosti bílkovin elektroforézou PAGE-SDS
a) příprava polyakrylamidového gelu pro vertikální elektroforézu
b) stanovení Mr vybraných proteinů elektroforézou v polyakrylamidovém gelu v přítomnosti SDS